华南农业大学学报

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• 3种益生菌对牛蛙生长性能、血液生化指标、免疫抗氧化能力及肠道健康的影响

  梁冠宇, 熊攀, 陈智兵, 李琳娜, 蔡云川, 莫昌盛, 王国霞

  目的探究益生菌对牛蛙Aquarana catesbeiana生长性能、血液生化指标、免疫抗氧化能力及肠道健康的影响。方法以基础饲料为对照组，分别添加丁酸梭菌(2.92×107 cfu/g)、凝结芽孢杆菌(0.91×107 cfu/g)和酿酒酵母(质量分数为0.2%)配制试验饲料。选取432只初始质量为(38.94±0.04) g的牛蛙，随机分为4组，每组3个重复，每个重复36只，进行56 d的养殖试验。结果1)各组牛蛙的成活率、饲料系数和蛋白质沉积率无显著差异；丁酸梭菌组终末单蛙质量、增质量率和特定生长率均显著高于其他3组。2)试验组肝脏和肠道胰蛋白酶(TRY)活性均高于对照组，其中，丁酸梭菌和酿酒酵母组TRY活性显著高于对照组且丁酸梭菌组活性最高。3)丁酸梭菌组总胆固醇(T-CHO)浓度显著高于其他组，谷草转氨酶(AST)活性显著降低；酿酒酵母组血糖(GLU)浓度显著升高；对照组甘油三酯(TG)浓度和谷丙转氨酶(ALT)活性均显著高于3个试验组。4)试验组牛蛙的肝脏抗氧化指标包括碱性磷酸酶(AKP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和总抗氧化能力(T-AOC)，肠道溶菌酶(LZM)活性及血清免疫指标(LZM和AKP活性、T-AOC)均显著高于对照组。丁酸梭菌组在肝脏过氧化氢酶(CAT)活性、肠道AKP活性及多数免疫抗氧化指标中表现最佳，其肝脏丙二醛(MDA)含量和血清T-AOC与其他试验组无显著差异，而对照组MDA含量显著升高。酿酒酵母组肝脏LZM活性显著升高。结论饲料中添加丁酸梭菌、凝结芽孢杆菌和酿酒酵母可提升牛蛙消化酶活性以及免疫抗氧化能力、促进肠道绒毛生长，其中，丁酸梭菌的综合效果最优。

• 广深地区3种常见猫病毒的分离鉴定及遗传进化分析

  孙媛, 梁爽爽, 罗志莹, 王婷, 马静云

  目的猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)、猫细小病毒(Feline parvovirus，FPV)和猫疱疹病毒1型(Feline herpesvirus-1，FHV-1)是常见的高传染性、高致病性病原体，本文针对广深地区的这3种病毒开展研究，以期明确本地FCV、FPV和FHV-1的流行情况、遗传变异和演化方向。方法本研究于2021年10月至2022年6月收集了广州、深圳地区的动物医院、动物收容所和华南农业大学病猫的眼鼻口拭子、肛拭子样本，通过提取临床样本核酸、one step RT-PCR、常规PCR技术检测FCV、FPV及FHV-1；对阳性样品进行基因扩增及测序，利用DNAStar分析核苷酸序列相似性，使用MEGA 7.0构建系统发育树；使用克兰德尔−里斯猫肾(Crandell-Reese feline kidney，CRFK)细胞接种FCV、FHV-1阳性样品进行病毒分离，连续盲传至出现细胞病变，利用PCR、电子显微镜等技术鉴定分离毒株。结果379例具有临床症状的病猫中，FPV、FCV、FHV-1感染率分别为22.16%、19.00%和3.17%；病毒阳性率与猫只性别无关，6月龄及以下患猫中FCV、FPV检出率最高，分别为63.89%、58.33%，FHV-1在12月龄及以上患猫中阳性占比最高，为66.67%。已免疫“妙三多”疫苗的患猫中FCV、FHV-1、FPV均有检出，阳性率分别为75.00%、75.00%、20.24%。成功分离到7株FCV、1株FHV-1和2株FPV。7株FCV分离株全基因组与参考株的核苷酸相似性为75.0%~87.5%，7株FCV分离株形成了两大分支，GZ-1-249和GZ-1-184属于GI分支，而其他5株分离株均属于GII分支。14条FPV VP2基因序列与参考株的核苷酸相似性为97.4%~100.0%，14条序列与“妙三多”疫苗株M38246.1(FPV USA Cu4)等序列共同归属于一大分支。结论研究结果丰富了FCV、FPV和FHV-1相关流行病学数据，增强了对本地流行毒株的认识，为未来本土疫苗的研发和优化提供了重要支持。

• 食品动物源hvKP与cKP菌株毒力基因、耐药性和整合子−基因盒特征比较分析

  董含倩, 林子清, 李旭婷, 杨惟一, 林居纯

  目的比较四川省食品动物源高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent Klebsiella pneumoniae，hvKP)与经典肺炎克雷伯菌(Classical Klebsiella pneumoniae，cKP)的毒力基因、耐药性及整合子−耐药基因盒系统差异，揭示hvKP独特的致病性与耐药性机制，为兽医临床hvKP感染提供新的防控和治疗策略。方法采用拉丝试验和毒力基因PCR法对139株肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae，KP)进行hvKP、cKP分类鉴定；分别采用微量肉汤稀释法和PCR测序法检测菌株的药物敏感性和整合子−基因盒分布特征；采用多位点序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)对hvKP菌株进行分子分型。结果139株KP菌株中共检出16株hvKP(高黏液型，均携带rmpA+iucA+iutA)和123株cKP。相比于cKP，hvKP菌株中rmpA、iucA、aero、iroB、ybtA的携带率更高(P≤0.01)，且多毒力谱更复杂。所有KP菌株对抗菌药物呈不同水平的耐药性，多重耐药谱广泛，hvKP对卡那霉素、庆大霉素、多西环素及恩诺沙星的耐药率显著低于cKP(P≤0.05或P≤0.01)。本研究KP菌株中，IntI1检出率较高(hvKP：100.00%，cKP：99.19%)，只有1株hvKP携带基因盒，为arr3-dfrA27，31株cKP携带基因盒，包含9种不同阵列，以dhfrI-aadA2和dfrA12-orf-aadA2为主。在3株cKP中检出IntI2，但未携带任何基因盒。分子分型显示，hvKP的主要流行型为ST25(43.75%)和ST60(31.25%)，且这2种ST型菌株均表现出多重耐药性与复杂毒力谱并存的特征。结论四川省食品动物源KP菌株耐药性严重，整合子介导的耐药机制增加了耐药性传播的风险。尤其需要警惕hvKP，该类菌株携带复杂毒力因子并表现出严重耐药性，给兽医临床治疗带来严峻挑战。因此，在兽医临床实践中，快速准确地鉴别高毒力菌株、持续监测其耐药性，并据此制定最优治疗方案，尤为重要。

• EAME改性纤维素膜包覆炭基肥缓释机理研究

  陈源, 马睿彪, 郭力迅, 马巧智, 任永志, 吕娟, 蒋恩臣, 王明峰

  目的探究改性纤维素膜对炭基肥养分释放特性的影响，为构建合理的包膜型缓释肥提供科学依据。方法以微晶纤维素为前驱体，利用反式−9, 10−环氧十八烷酸甲酯(Trans-9, 10-epoxyoctadecanoic acid methyl ester，EAME)在不同浓度及温度参数下制备的改性纤维素薄膜制备炭−膜双控尿素肥，即ECBIUF (Trans-9, 10-epoxyoctadecanoic acid methyl ester cellulose membrane coated biochar-based infiltrated urea fertilizer)。通过淋溶试验获取尿素释放特性曲线，利用接触角测试、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射以及扫描电镜等对释放前后包膜进行表征，构建释放动力学模型。结果与未改性的生物炭基渗融尿素肥(Biochar-based infiltrated urea fertilizer，BIUF)相比，EAME改性纤维素膜有效减缓尿素释放，前2次养分淋出率由BIUF的53.29%降至22.62%，降幅为58%；淋溶次数由12上升为24，增幅达100%。ECBIUF缓释性能随改性溶液浓度的升高而增强，前2次养分淋出率由42.42%降至22.62%；而随着改性温度的升高，ECBIUF缓释性能略有下降，前2次养分淋出率由22.62%上升至24.31%。动力学分析表明，ECBIUF养分释放存在3个阶段，分别是表层结晶尿素快速释放阶段、生物炭孔隙中物理吸附尿素减速释放阶段以及与生物炭化学结合态尿素缓慢释放阶段。结论EAME改性纤维素膜因—OH等基团对尿素的分子作用力及长烃链的疏水作用可增强炭基肥缓释性能，有助于提高肥料养分有效性，为制备包膜型缓释肥提供新途径。

• 基于面向对象法与U-Net模型的广东省云浮市云城区耕地后备资源遥感提取

  于洋, 李哲凡, 谢淑娟, 刘振华, 欧佳铭, 司佳禾

  目的提升耕地后备资源信息提取的效率与精度，满足现代农业发展对土地资源动态监测的需求。方法以广东省云浮市云城区为研究区域，提出一种融合面向对象规则构建与深度学习的耕地后备资源信息提取方法。利用高分6号高分辨率卫星影像开展多尺度图像分割，结合逐步剔除法构建地类识别规则，提取典型地类样本。随后，基于规则样本构建U-Net深度学习模型的训练标签数据集，完成耕地后备资源提取与分类。结果针对云城区的最佳分割尺度为300，在该尺度下，同类地物可以被有效分割，草地与裸地边界划分清晰。本研究方法在研究区的总体精确率达87.3%，平均交并比和F1分数分别达到75.4%和86.7%，能够实现复杂地物边界的精准提取。基于改进U-Net的深度学习方法能够有效减少误分类现象，特别是在边界模糊区域和混合像元区域，相较于传统面向对象方法，精确率提高了约5个百分点。结论本研究构建的遥感智能提取方法兼具高精度与时效性，能够为地方土地利用规划、耕地资源管理及生态保护提供有力支撑，具有良好的推广应用前景。

• 越南蔷薇菌YJ21菌株鉴定及生防活性测定

  陈楚滟, 尹凯, 张腾宇, 胡志剑, 陈圣文, 梁志彬, 邓懿祯

  目的从红树林土壤筛选出可抑制甘蔗鞭孢堆黑粉菌Sporisorium scitamineum、稻瘟病菌Magnaporthe oryzae和辣椒疫霉Phytophthora capsici生长发育和促进植物生长的细菌，为上述病原菌引起的作物病害防控提供生防资源。方法采用稀释涂布法分离红树林土壤中的细菌；通过16S rRNA和全基因组测序方法鉴定细菌的种属；采用平板对峙法、孢子萌发试验、离体叶片接种法和盆栽接种法测定分离的细菌对植物病原菌的拮抗效果；采用Salkowski比色法测定该菌株产吲哚乙酸(IAA)的能力，并通过浸种法测定其对水稻种子萌发的促进效果。结果从红树林土壤中分离出1株细菌YJ21，基因组进化分析将其鉴定为越南蔷薇菌Rossellomorea vietnamensis。YJ21菌株的菌液对稻瘟病菌和辣椒疫霉生长的抑制率分别为34.62%和39.87%；YJ21菌株的发酵上清液可抑制甘蔗鞭孢堆黑粉菌冬孢子萌发，对稻瘟病菌孢子萌发的抑制率为90.48%，并能降低稻瘟病菌对水稻的致病力。此外，YJ21菌株还具有产IAA和蛋白酶的能力，对水稻种子萌发的根和芽生长具有明显的促进作用。结论分离自红树林土壤的越南蔷薇菌YJ21菌株在稻瘟病的防控上具有潜在应用价值。

• 菠萝黑钉病病原菌分离鉴定及防控药剂筛选

  廖苗萌, 王世鑫, 江林金, 阮贤聪, 黄庭鸿, 徐汉虹, 林菲

  目的分离和鉴定菠萝Ananas comosu黑钉病的病原菌种类，并进行防治药物筛选及田间联用药物筛选，为该病发生规律和机制研究及绿色防控提供依据。方法对病原菌进行分离和纯化，采用柯赫氏法则验证其致病性，根据菌株的形态学特征和多基因序列分析确定病原菌种类；采用菌丝生长速率法测定病原菌对5种单剂和8种复配药剂的抑制效果。结果分离纯化共获得9个属的真菌菌株，其中有2株菌株可侵染菠萝小果引起褐斑，结合形态学鉴定和多基因序列分析，确定引起菠萝黑钉病的病原菌为轮枝镰刀菌Fusarium verticillioides LDL-3和绳状篮状菌Talaromyces funiculosus LL-3，且LDL-3的致病性强于LL-3。杀菌剂毒力测试结果显示，氟环唑、苯醚甲环唑、吡唑醚菌酯、咪鲜胺锰盐及复配药剂对病原菌生长均有影响；咪鲜胺锰盐对LDL-3抑制效果较好，EC50为0.009 μg/mL；吡唑醚菌酯对LL-3表现出较好的抑制效果，EC50值为0.134 μg/mL；8种复配制剂中，苯甲·吡唑酯(苯醚甲环唑和吡唑醚菌酯体积比3∶1)对2种病原菌均有较好的抑制效果，EC50均小于0.2 μg/mL；当杀虫剂、杀菌剂、生长调节剂联合使用时，仍能较好地抑制病原菌的生长，EC50均小于0.2 μg/mL。结论菠萝黑钉病主要由镰刀菌属和篮状菌属真菌侵染引起，苯甲·吡唑酯(3∶1，v/v)对引起该病害的病原菌具有较好的抑制效果，可为田间催花膨果期防治菠萝黑钉病提供轻简有效的方案。

• 基于深度强化学习的柑橘黄龙病智能动态防控策略

  张勇威, 骆智聪, 邓小玲, 兰玉彬

  目的柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing, HLB)传播受多重动态因素耦合影响，传统最优控制方法因计算复杂度高且依赖精确模型，导致其在实际应用中存在局限性。为解决这一问题，本文提出了一种基于双延迟深度确定性策略梯度(Twin delayed deep deterministic policy gradient, TD3)的HLB智能动态防控方法。方法首先，构建融合宿主−媒介交互机制的HLB传播控制动力学模型，并通过离散化处理将其转化为马尔科夫决策过程环境；随后，引入TD3算法，设计生物约束兼容的多目标奖励函数；最后，提出HLB防控策略。结果仿真试验结果表明，与DDPG、PPO等传统算法相比，本文提出的基于TD3的HLB动态防控策略在多项关键指标上均呈现出明显优势，系统状态收敛至无病平衡点的速度分别提升了26.59%和20.99%；累计控制成本分别降低了23.79%和19.90%；杀虫剂峰值使用量减少了约35.57%。数值分析结果进一步表明，在HLB爆发初期，及时喷洒杀虫剂干预对阻断HLB传播链具有关键作用；动态防控策略相较于恒定控制策略，在抑制病害扩散效果和降低实施控制的成本方面更具优势。结论本研究提出的基于TD3的HLB防控方法为高效控制HLB传播提供了新的视角，展示了深度强化学习方法在农业病害防控中的潜力。

• 基于思维链蒸馏和反事实推理的农业命名实体识别技术

  吴泽震, 张奕, 黄泳彬, 兰玉彬, 孟祥宝, 邓小玲

  目的解决大型语言模型(Large language model, LLM)在农业领域命名实体识别(Named entity recognition, NER)任务中的幻觉、上下文逻辑不一致以及无法在低资源设备上运行的问题。方法使用参数为671×109(671B)的DeepSeek-R1，即DeepSeek-R1-671B作为教师模型，将其领域知识迁移至参数量更小的学生模型，学生模型选取DeepSeek、Qwen和Llama的1.5×109(1.5B)、7×109(7B)和14×109(14B)低参数版本蒸馏并进行反事实推理训练，模型效果在农业病害专用数据集CropDiseaseNer上进行试验验证。结果对比一系列蒸馏后学生模型的性能表现，结果表明DeepSeek-14B实体识别F1达89.60%，且参数量仅为教师模型的2.08%。其性能相较于通用大模型GPT-mini-14B(F1为57.64%)和通用LLM的领域适配模型GLiNER(F1为82.96%)有较大提升。进一步分析表明，同源架构的DeepSeek学生模型因参数对齐性优势，在病害实体、病原菌属名等长尾类别识别任务中显著优于异源架构模型。结论本研究验证了知识蒸馏在农业领域NER任务中的有效性，为资源受限场景下的实体识别技术提供了新的解决方案。

• 基于改进YOLOv7算法的自然环境下柑橘缺陷检测

  余林豪, 钟沅, 宋淑然, 熊俊涛, 孙道宗, 薛秀云, 代秋芳, 李震

  目的柑橘缺陷识别是实现柑橘果实自动采摘、把控柑橘果实品质的关键环节。本研究致力于提高自然环境下的柑橘缺陷识别精度，实现智能采摘的全天候作业。方法通过对关键模块进行优化，提出改进的YOLOv7算法，具体做法包括引入完全交并比(Complete intersection over union, CIoU)损失函数提升边界框回归精度；采用HardSwish激活函数增强网络学习与计算效率；融合无注意力机制 (Attention free transformer, AFT)强化目标特征识别；结合残差多层感知机(Residual multi-layer perceptron, ResMLP)和动态卷积(Dynamic convolution, DC)技术，提高模型在复杂光照下的适应性与稳定性。结果利用双光源系统，该算法可实现自然环境下柑橘果实和缺陷的全天候检测，在自然光或白光下能检测黑斑、裂纹等缺陷；在夜间可将紫光作为补充手段，基于荧光反应检测在白光或自然光下不明显的缺陷。试验结果表明，改进后的YOLOv7算法，在日间对柑橘及缺陷的识别精度分别达97.9%和92.8%，比原算法提升3.8和13.4个百分点；在夜间对缺陷识别精度为82.4%。结论本文提出的柑橘缺陷识别方法准确率高、适用时段广，可为柑橘产业采摘智能化提供新思路。